Cellular Responses of Human Neuroblastoma Cells to 1,3-DMAA Exposure

Resumo

Introdução: A 1,3-dimetilamilamina (1,3-DMAA), anteriormente utilizada como descongestionante nasal até à década de 1980, foi retirada do mercado devido aos seus efeitos adversos, incluindo cefaleias, nervosismo, estimulação psicomotora e tremores (1). Em 2005, a 1,3-DMAA reapareceu no mercado, estando atualmente presente em suplementos alimentares para supressão do apetite, produtos ergogénicos destinados à melhoria do desempenho atlético e produtos recreativos com propriedades psicoativas (2). Apesar da sua utilização controversa e da proibição em várias competições, a sua deteção em análises antidoping e suplementos continua a suscitar preocupação significativa. Embora os seus efeitos tóxicos sejam conhecidos, o impacto neurotóxico permanece ainda insuficientemente esclarecido (3-4). Objetivo: Este estudo teve como objetivo investigar os mecanismos citotóxicos induzidos pela 1,3-DMAA num modelo celular neuronal humano (SH-SY5Y), contribuindo para uma melhor compreensão da sua toxicodinâmica. Métodos: As células SH-SY5Y foram expostas durante 48 h a 1,3-DMAA (1,3×10⁻⁴ a 1,5×10¹ mM; n=5). A atividade metabólica mitocondrial foi avaliada através do ensaio MTT e a integridade lisossomal através do ensaio de captação do vermelho neutro (NR). Com base nos resultados do MTT, as células foram subsequentemente expostas às concentrações EC20 (4,21 mM), EC40 (4,91 mM) e EC60 (5,59 mM), sendo avaliadas as alterações na produção intracelular de espécies reativas de oxigénio (ROS) e no potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) através de sondas fluorimétricas. As características autofágicas foram avaliadas por coloração com laranja de acridina (AO), de modo a detetar organelos vesiculares ácidos. Resultados: A 1,3-DMAA induziu citotoxicidade dependente da concentração, com maior impacto na função mitocondrial do que na integridade lisossomal, evidenciado por valores de EC50 inferiores no ensaio MTT em comparação com o ensaio NR (5,24 mM versus 6,36 mM, respetivamente). A 1,3-DMAA induziu um aumento dependente da concentração nos níveis intracelulares de ROS desde a EC20 (236,67%; p<0,001) e EC40 (211,87%; p<0,01), atingindo o máximo na EC60 (272,05%; p<0,0001). Em contraste, o ΔΨm manteve-se inalterado nas concentrações mais baixas, observando-se um aumento significativo na EC60 (317,32%; p<0,0001). A coloração com AO revelou igualmente um aumento de organelos vesiculares ácidos nas concentrações mais elevadas. Conclusões: O aumento concomitante de ROS e da hiperpolarização mitocondrial indica a instalação de um estado pró-oxidante. O aumento de organelos vesiculares ácidos sugere a ativação de processos autofágicos e/ou progressão para apoptose. Estes resultados fornecem novos conhecimentos mecanísticos sobre a neurotoxicidade induzida pela 1,3-DMAA e estabelecem uma base para futuras investigações toxicológicas.